抗体技术服务

一、兔多克隆抗体制备服务

1、服务要求:目前我们暂不提供抗原制备服务,客户需自己提供抗原。我们对抗原的要求如下:1)3-5mg蛋白,纯度在85%以上;2)样品溶解于pH偏中性的缓冲液,最好为PBS。如含有尿素,去污剂或有机试剂等请事先告之;3)浓度不低于0.2mg/ml。

2、制备方法:我们用两只健康新西兰大白兔进行抗体制备实验,免疫4次,保证效价在1:32000以上(P/N≥2.1)。实验周期为90天。具体实验过程请参见下表:
 


时间(天) 实验内容 具体说明
0-7 1)抗原检测
2)阴性血清采集
1)SDS-PAGE检测抗原纯度;2)抗原浓度检测;3)制备1.5ml免疫前血清
8 第1次免疫 抗原与弗氏完全佐剂乳化,多点注射
29 第2次免疫 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射
36 取血样1 耳缘静脉取血2ml,制备1ml血清
50 第3次免疫 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射
57 取血样2  耳动脉或心脏采血10ml,制备5ml血清
71 第4次免疫 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射
81 颈动脉放血 每只兔子可得到60ml左右的血清。
82-88 血清效价检测 用间接ELISA测定2-4免血清效价
89 快递交货 1)100ml血清;2)效价检测报告

3、交货内容

1)1ml免疫前血清;2)100ml-150ml免疫血清,效价大于1:32000;3)效价检测报告:2-4免血清的间接ELISA结果。

备注:我们提供抗体纯化服务,但需要客户额外支付费用。


二、单克隆抗体

1、服务要求:目前我们暂不提供抗原制备服务,客户需自己提供抗原。我们对抗原的要求如下:1)1-3mg纯化蛋白,纯度在85%以上;2)样品溶解于pH偏中性冲液,最好为PBS。如含有尿素,去污剂或有机试剂等请事先告之;3)浓度不低于0.2mg/ml。

2、制备方法:我们免疫4只Balb/c小鼠,通过细胞融合与筛选制备单克隆抗体。实验周期为150天。具体实验过程请参见下表:

时间(天) 实验内容 具体说明
0-7 1)抗原检测 1)SDS-PAGE检测抗原纯度;2)抗原浓度检测;
8 第1次免疫 抗原与弗氏完全佐剂乳化,多点注射
29 第2次免疫 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射
50 第3次免疫 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射
57 取血样 眼眶取血100-200ul,用于免疫效果检测
71 加强免疫 抗原不加佐剂,剂量加倍,腹腔注射
74 细胞融合 用PEG1450将脾细胞与SP2/0细胞融合
84 检测与克隆1 细胞培养
94 检测与克隆2 细胞培养
104 检测与克隆3 克隆一般进行3次,直到阳性率达到100%为止
105-114 检测与扩大培养 用于注射小鼠制备腹水与细胞株的冻存
115-120 注射腹水 等待腹水长出
121-140 采集腹水 完成腹水采集
141-147 腹水纯化与检测 采用辛酸-硫酸铵法纯化腹水
148-150 交货 1)实验记录;2)两株单克隆的杂交瘤细胞;3)两株单抗的纯化腹水各5ml。
 3、交货内容

1)实验记录;
2)两株单克隆的杂交瘤细胞;
3)两株单抗对应的纯化腹水各5ml。